RIPA裂解液（加强型）
货号：FWP101-A 规格：100ml
货号：FWP101-B 规格：500ml
【原理】
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RI P A 裂解液(加强型)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，多种成分均可以从细胞中提取总蛋白。其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA 裂解液(通用型)。本产品主要由Tris 、SDS、NP-40、sodium deoxycholate 等组成，可以显著性增强蛋白的提取效果，对于难容的膜蛋白也有较好的提取效果。
【实验所需试剂但未提供的物品】
蛋白酶体抑制剂及根据实验需要其他酶抑制剂（比如磷酸酶抑制剂）
【储存条件及有效期】
1、4℃条件下保存。
2、本试剂盒有效期一年，请在有效期内使用。
3、为了避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
【使用方法】
对于培养细胞样品：
1. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入蛋白酶体抑制剂等。
2. 样本处理
对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍；用胰蛋白酶消化液消化细胞，再加入大于胰酶2倍体积的完全培养基终止消化，离心去除上清。按照6孔板每孔加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解；离心取上清后，进行后续的SDS-PAGE 、Western 、免疫沉淀等操作。
对于悬浮细胞，离心收集细胞沉淀，充分吸弃培养基后，按照6孔板每孔细胞加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，可适当分装细胞，分批进行裂解
3. 一般裂解时间建议15-20分钟可以充分裂解，而后4℃，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μL或200μL 。
对于组织样品：
1. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入蛋白酶体抑制等。
2. 把组织剪切成细小的碎片。
3. 按照每20毫克组织加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注意事项】
1. 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。
2. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行，裂解每3-4分钟需要弹匀裂解液细胞溶液
3. 若需做Co-IP实验，建议购买我们公司Co-IP专用裂解液。
