含蛋白酶磷酸酶抑制剂的 RIPA(通用型）
货号：FWP107 规格：100ml
【原理】
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常 规的 Western、IP 等。本产品 RIPA 裂解液已经加入了蛋白酶和磷酸酶抑制剂 PMSF, Na3VO4 等。
【储存条件及有效期】
1、-20℃条件下保存。
2、本试剂盒有效期一年，请在有效期内使用。
3、为了避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
【使用方法】
对于培养细胞样品：
1. 取适当量的裂解液。
2. 样本处理
对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 一般裂解时间建议15-20分钟可以充分裂解，而后4℃，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μL或200μL 。
对于组织样品：
1. 取适当量的裂解液等。
2. 把组织剪切成细小的碎片。
3. 按照每20毫克组织加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注意事项】
1. 本品已经加入了蛋白酶和磷酸酶抑制剂，如果特殊蛋白仍容易降解或者发生去磷酸化等，建议额外添加抑制效果 更好的蛋白酶和磷酸酶抑制剂。
2. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
