5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 说明书
【产品信息】
-20℃保存,5× 1ml
【产品描述】
本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS,DTT,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白,电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
【操作方法】
1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×SDS-PAGE上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
2. 按照每4 μl蛋白样品加入1 μl 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
【注意事项】
1. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右;胶浓度12%时,约在20kd左右;胶浓度15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。