高效感受态制备试剂盒

高效感受态细菌制备试剂盒

【产品简介】

高效感受态细菌制备试剂盒(Competent Cell Preparation Kit) 是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成，主要用于快速制备高转化效率大肠杆菌感 受态细菌，操作便捷，转化效率高。使用本试剂盒可以使感受态效率达到10⁸ -10⁹ cfu/μg质粒。且也非常适合于转化基因克隆时的连接产物。

本试剂盒适用于大部分常见的大肠杆菌，包括DH5α、Stbl3, BL21，JM109、TG1、HB101和XL-1等。本试剂盒可以分多次使用，且使用前需要解冻。可以制备足够100次转化的感受态细菌。

【产品组成】

【实验步骤】

(注意：划线、接种、加液、弃液、分装等操作均在超净台内进行)

1. 划线与涂板：为得到最佳感受态效率，须先把甘油菌或其它形式保存的菌种划线或涂LB平板，并培养过夜。

2. 接种：用一个灭菌的塑料枪头或牙签，从平板上挑取一个单克隆，接种到3ml的

3. LB的细菌培养试管内。

4. 培养：37ºC约200rpm培养过夜，通常培养时间约16h左右，建议不超过18h。

5. 再接种培养：按照1:500的比例将培养液接种到试剂盒中感受态细菌培养液。例如取100μl的上述步骤新鲜过夜的菌液接种到50ml本试剂盒提供的感受态细菌培养液中，37ºC约200rpm培养。一般大约培养2.5-3.5小时后OD600可以达到0.6-0.7。

6. 制备感受态细菌：

a) 在培养的细菌OD600达到0.6-0.7时，把培养的菌液置于冰上，冷却15min。注意：后续所有操作均须在冰上进行。且离心机必须先预冷。

b) 4ºC 4000g离心5分钟收集细菌，弃上清。

c) 如果离心前菌量为50 ml，按后续操作进行，其它体积则只需按比例换算后进行后续操作。

d) 用20 ml在冰上预冷的感受态制备试剂A轻轻重悬细菌沉淀，而后冰浴15min。

e) 4ºC 4000g离心5min收集细菌，弃上清。

f) 用2 ml预冷的感受态制备试剂B轻轻重悬细菌沉淀。冰浴15min。

g) 而后在冰上进行分装，可以根据需要适当分装成50-200μl/管。

h) 立即使用或用-70-80℃、液氮保存。通常6个月内效率不会有明显的变化。

【注意事项】

1. 在制备感受态细菌的过程中均使用的LB不含抗生素。

2. 感受态细菌培养液由于含有较高浓度的蛋白等物质，在反复冻融后会产生少量沉淀，属正常现象。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不能用于临床诊断、治疗食品、药品。只能保存于专业实验室。

4. 实验操作过程请穿实验服并戴一次性手套操作。