胶回收试剂盒

普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)

【产品简介】

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，回收100bp-30kb DNA片段，回收率高达80%，每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为35ug。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

【产品组成】

【储存条件】

该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

【操作步骤】

使用前请先在Buffer PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1.柱平衡步骤：向吸附柱FB1中(吸附柱放入收集管中)加入500μlBuffer BL,12000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子)

2.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分)放入干净的离心管中，称取重量。

       3.向胶块中加入等倍体积Buffer PN(如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100μl，则加入100μl Buffer PN)，50℃水浴放置，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶

的胶块，可继续放至几分钟或再补加一些溶胶液，直至胶块完全溶解(若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块)。

4.将上一步所得溶液加入一个吸附柱FB1中(吸附柱放入收集管中)，室温放置2 min，12000 rpm离心30～60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱FB1放入收集管中。

5.向吸附柱FB1中加入600 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000 rpm离心30~60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱FB1放入收集管中。

6.重复操作步骤5。

7.将吸附柱FB1放回收集管中，12000 rpm离心2 min，尽量除尽漂洗液。将吸附柱FB1置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。

8.将吸附柱FB1放到一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量Buffer EB，室温放置2min。12000 rpm离心2 min收集DNA溶液。

【注意事项】

  ①Buffer BL的加入能改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温或潮湿及其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。使用前请先检查Buffer BL是否出现浑浊，如有浑浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

②电泳时最好使用新的电泳液，以免影响电泳和回收效果。

③如下一步实验要求较高，则尽量使用TAE电泳缓冲液。

④所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

⑤切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

⑥如果回收率较低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加入少量HCI将pH值调到5×7之间。

⑦回收小于100 bp及大于10kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。

⑧回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。