CRISPRi干扰与CRISPRa激活

一、CRISPRi干扰

利用催化失活的Cas9（dCas9）与阻遏结构域（如KRAB）融合成一个新的蛋白dCas9-KRAB,该复合物在sgRNA的引导下靶向目标基因启动子区域时会导致基因表达的抑制，这个过程被称为CRISPRi（CRISPR干扰）。由于基因组DNA没有任何变化，故CRISPRi实现了敲低，而不是敲除。

由于CRISPRi的脱靶效率更低，因此可以替代shRNA技术，实验数据更加可靠、稳定。主要用于LncRNA基因的敲低、编码蛋白基因的敲低等；

二、CRISPRa激活

dCas9与VP64的融合（dCas9-VP64）也可用来激活基因表达，这被称为CRISPRa（CRISPR激活），达到上调基因的目的。为了增强激活效果，dCas9融合体需要招募多个激活结构域，包括多重融合体（SAM, 即MS2, p65和HSF1的三重融合体）。

该技术尤其是适合大片段基因（大于5000bp）的基因过表达。更加方便、有效。