CRISPR-Cas9基因敲除

一、 基本介绍

CRISPR-Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。2020年诺贝尔化学奖授予CRISPR-CAS9基因编辑技术。CRISPR/Cas9系统本是原核生物拥有的一种防御机制，现被作为医学和生命科学研究领域重要的基因编辑工具CRISPR/Cas9系统因其系统成分简单、操作方便、突变效率高、成本低廉的优点，已成为现在发展最为迅速、国内外学者广泛研究开发、应用于多种生物体基因组的定向基因编辑技术，已应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰。

本公司再多个种属细胞中成功构建了基因敲除细胞系，敲除效率高，且不受靶位控制。

一、 原理简介

（图片来源于公开发表论文，非本公司绘制）

三、成功案例

本公司利用CRISPR-Cas9技术在肿瘤细胞C中对人源PAI-1基因进行敲除。结果如图1和2

图1.PAI-1基因敲除基因组水平鉴定结果。通过对PAI-1基因组DNA测序结果表明，在PAI-1蛋白编码区发生了14bp和8bp的缺失，即达到敲除PAI-1效果。

图2.Western blot蛋白水平鉴定结果PAI-1被成功敲除。